Параметры ПЦР-реакции
циклы
копий
Обычно Nₜ = 100–1000 копий (зависит от детектора)
%
Оптимально 90–110%, 100% — идеальная амплификация

Как интерпретировать Ct?

Пороговый цикл (Ct, threshold cycle) — это цикл ПЦР, в котором флуоресценция превышает пороговый уровень. Чем меньше Ct, тем больше исходной ДНК в образце.

Формула абсолютной квантификации: N₀ = Nₜ × (1 + E/100)⁻ᶜᵗ, где N₀ — исходное количество копий, Nₜ — количество копий на пороговом цикле (зависит от прибора и метода детекции, обычно 100–1000).

Для относительной квантификации (метод ΔΔCt): Используйте N₀(образец)/N₀(контроль) = 2-(ΔCt) при 100% эффективности.

Результат расчёта

📖 Примеры значений Ct

Очень низкий Ct

Ct = 18, высокая концентрация ДНК

Стандартный Ct

Ct = 25, средняя концентрация

Высокий Ct

Ct = 32, низкая исходная ДНК

С пониженной эффективностью

95% эффективность, Nₜ = 500

Высокий порог детекции

Nₜ = 1000 копий

Затруднённая амплификация

Низкая эффективность, высокий Ct